免疫细胞研究
1 PBMC分离培养
外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）的分离是免疫学研究中的一项基本技术。PBMC中主要包括T淋巴细胞（80%），B淋巴细胞（4-10%），单核细胞，吞噬细胞，树突状细胞和其他少量细胞类型。分离PBMC的主要目的是为了将多核细胞和红细胞去除，从而能够很方便地模拟体外的血液免疫环境。
目前国内外分离PBMC的常用方法是葡聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法。红细胞、粒细胞比重大，离心后沉于管底；淋巴细胞和单核细胞的比重小于或等于分层液比重，离心后漂浮于分层液的液面上，也可有少部分细胞悬浮在分层液中。吸取分层液液面的细胞，就可从外周血中分离到单个核细胞。这些细胞是免疫系统的重要组成部分，参与体液免疫和细胞免疫。单个核细胞广泛应用于微生物学、病毒学、疫苗开发、移植和再生生物学以及毒理学等研究和临床中。
服务流程
（1）根据客户实验需求，制定实验方案和样本要求。
（2）根据取样要求进行取样，并将样品按要求稀释。
（3）分离PBMC
（4）充分洗涤、离心。
（5）将沉淀细胞重悬于培养基中，进行细胞活力检测
（6）根据需求进行下一步实验或者细胞冻存。
2 T细胞分离、诱导、培养
T细胞是淋巴细胞的主要组分，它具有多种生物学功能，如直接杀伤靶细胞，辅助或抑制B细胞产生抗体，对特异性抗原和促有丝分裂原的应答反应以及产生细胞因子等，是身体中为抵御疾病感染、肿瘤而形成的。目前，CAR-T细胞疗法是一种基于体外改造的T细胞，使其表面表达特异性识别肿瘤表面抗原的受体片段的癌症免疫疗法，在血液系统肿瘤中已取得突破性进展。
服务流程
（1）根据客户实验需求，制定实验方案。
（2）分离PBMC。
（3）缓冲液重悬细胞，调整细胞至方案要求。
（4）采用免疫磁珠法进行分选。
（5）加入抗体刺激T细胞激活与扩增
（5）T细胞表面标志物、细胞纯度、细胞活力检测。
（6）根据需求进行下一步实验或者细胞冻存。
3 γδT细胞分离、诱导、培养
根据T细胞表面的TCR受体组成不同，可以分为αβT细胞和γδT细胞，其中机体主要的T细胞群为αβT细胞，在外周血中，αβT细胞占成熟T细胞的95%-99%，虽然γδT细胞仅占成熟T细胞的1%-5%，但其在粘膜组织中分布丰富，在γδT细胞受到抗原刺激后数分钟之内即可进入激活状态。由于激活后能够迅速地产生多种细胞因子，γδT细胞参与构成了抗感染和抗肿瘤的第一道防线，在人体的固有免疫系统中发挥重要的作用。γδT细胞作为免疫细胞药物具有非常广阔的前景。γδT细胞所具有的不依赖MHC识别、无细胞因子风暴和脱靶效应、广谱抗肿瘤、无需基因修饰等特性，极大地克服CAR-T技术的不足。
服务流程
（1）根据客户实验需求，制定实验方案。
（2）分离PBMC。
（3）缓冲液重悬细胞，调整细胞至方案要求。
（4）采用免疫磁珠法进行分选。
（5）γδT细胞表面标志物、细胞纯度、细胞活力检测。
（6）根据需求进行下一步实验或者细胞冻存。
4 NK细胞分离、诱导、培养
NK细胞主要分布于外周血，占外周血淋巴细胞总数的5％-10％，不需抗原刺激也可以直接识别杀伤靶细胞。NK细胞属于白细胞的一种，它是人体忠诚的卫士，主要任务就是亡羊补牢——消灭那些已经被病毒感染的细胞，从而把病毒消灭在“摇篮”中。另外，身体里面的肿瘤细胞也是它们追杀的对象。NK细胞在机体免疫监视和早期抗感染免疫过程中起到非常重要的作用，是一种有效、安全的肿瘤生物免疫治疗方法，具有广阔的应用前景。一般从人外周血单个核细胞扩增培养NK细胞。
服务流程
（1）根据客户实验需求，制定实验方案和样本要求。
（2）分离PBMC。
（3）缓冲液重悬细胞，调整细胞至方案要求。
（4）采用免疫磁珠法进行分选。
（5）NK细胞表面标志物、细胞纯度、细胞活力检测。
（6）根据需求进行下一步实验或者细胞冻存。
5 巨噬细胞分离、诱导、培养
巨噬细胞（Macrophages）是一种位于组织内的白血球，源自单核细胞是三大抗原提呈细胞之一, 具有广泛的生物学效应, 如抗感染、抗肿瘤、参与免疫应答和免疫调节等。
单核细胞是血液中最大的血细胞，目前认为它是巨噬细胞的前身。单核细胞来源于骨髓干细胞，在骨髓中经前单核细胞分化发育为单核细胞，然后由骨髓释放入血，经过血液循环便移行到各个组织中，分化成组织中的巨噬细胞。
服务流程
（1）根据客户实验需求，制定实验方案和样本要求。
（2）分离PBMC。
（3）缓冲液重悬细胞，调整细胞至实验方案要求。
（4）采用免疫磁珠法分离出CD14+的单核细胞。
（5）使用流式细胞术检测单核细胞分离纯度。
（6）使用细胞因子诱导法使CD14+单核细胞向巨噬细胞分化。
（7）巨噬细胞表面标志物、纯度、细胞活力及功能检测。
（7）根据需求进行下一步实验或者细胞冻存。
6 DC细胞分离、诱导、培养
DC细胞是迄今为止已发现的功能最为强大的抗原提呈细胞，能够吞噬、处理肿瘤/病毒抗原，并把抗原信号传递给淋巴细胞。通过提取患者自身的单核细胞在体外诱导分化为成熟的DC细胞，并负载特异性的肿瘤抗原后，回输患者体内，可以激活人体的免疫系统，使其更具有靶向性，发挥靶向杀灭肿瘤细胞的作用，是目前较为成熟的肿瘤生物治疗方法之一。
业务流程
（1）根据客户实验需求，制定实验方案和样本要求。
（2）分离PBMC。
（3）缓冲液重悬细胞，调整细胞至方案要求。
（4）采用免疫磁珠法进行分选：
（5）DC细胞表面标志物、细胞纯度、细胞活力检测。
（6）根据需求进行下一步实验或者细胞冻存。
7 CAR-T细胞的构建
嵌合抗原受体T细胞（Chimeric antigen receptor T cell, CAR-T）疗法是指通过基因修饰技术，将带有特异性抗原识别结构域及T细胞激活信号的遗传物质转入T细胞，使T细胞能够识别肿瘤细胞表面的特异性抗原，并通过释放多种免疫因子杀伤肿瘤细胞，从而达到治疗肿瘤的目的，而且还可形成T细胞免疫记忆从而获得特异性的抗肿瘤长效机制的疗法。
CAR-T细胞疗法是一种基于体外改造T细胞，使其表面表达特异性识别肿瘤表面抗原的受体片段的癌症免疫疗法，改造后的T细胞输入患者体内，不需要抗原递呈细胞（APC）的帮助，直接靶向体内癌细胞并发挥免疫杀伤作用。
业务流程
（1）根据客户实验需求，制定实验方案。
（2）构建靶向肿瘤细胞相关表面抗原的CAR分子。
（3）从患者外周血单个核细胞（PBMC）中分选纯化出T细胞。
（4）采用电穿孔、包病毒等方式将提前设计好的CAR分子导入T细胞中。
（5）筛选成功导入CAR分子的CAR-T细胞，并在体外刺激其扩增。
8 TCR-T细胞的构建
T细胞受体基因工程改造T细胞（T cell receptor-gene engineered T cells, TCR-T）疗法是指通过对自身T细胞进行肿瘤抗原特异性TCR基因工程改造，使之能够特异性识别肿瘤细胞并发挥抗肿瘤免疫反应的过继免疫治疗方法，对体内缺乏肿瘤特异性T细胞的患者是一种有效的治疗手段。MHC几乎表达在每个细胞表面，其作用是将细胞内蛋白抗原片段展现在细胞表面；而存在于细胞表面的TCR通过与HLA的结合判断靶细胞是否正常，如果T细胞发现其中有变异的蛋白片段，就会对靶细胞发起攻击，杀灭靶细胞。这意味着如果将可以识别某些特定肿瘤抗原的TCR表达在T细胞表面，就可以让这些TCR-T具备对肿瘤的杀伤能力。更重要的是由于TCR可以识别细胞内部的抗原，所以TCR-T技术在靶点的选择性上拥有巨大的优势。
业务流程
（1）根据客户实验需求，制定实验方案。
（2）筛选合适的肿瘤特异性抗原，以及对该抗原具有高度特异性的TCR αβ链序列。
（3）从患者体内分离出T细胞。
（4）将上述能够识别肿瘤特异性抗原的TCR αβ链序列包入病毒基因组，构建病毒载体。
（5）病毒转染T细胞，将目标TCR序列引入T细胞中，获得能够特异性识别肿瘤抗原的TCR-T细胞。
（6）TCR-T细胞体外培养，大量扩增。